（一）無菌操作前的準備工作
培養(yǎng)材料接種時的無菌操作過程除上述各項消毒滅菌操作外，還需完成以下無菌操作步驟，從而獲得接種的無菌培養(yǎng)材料。
工作人員無菌操作前需用肥皂刷洗雙手及手臂，并用流水沖凈，并對手臂消毒后穿戴好滅菌工作服、工作帽和口罩，更換拖鞋，才能進入無菌操作區(qū)。如進入層流操作室進行實驗操作，應完成緩沖準備區(qū)內(nèi)的淋浴、一次更換滅菌衣帽、拖鞋；手臂消毒、二次更換滅菌防護衣帽、手套、拖鞋等；再在風淋區(qū)進行無菌風淋后方可進入層流操作室。進入無菌操作區(qū)后，再用70%～75%的酒精擦拭雙手和前臂，完成無菌操作準備工作。
用70%～75%酒精擦洗工作臺面后，將已消毒滅菌的實驗用品取出，并將操作器械放置在無菌器械支架上，然后開始實驗操作。在實驗操作過程中，對所有操作器械每次使用后都要進行滅菌，常采用酒精燈火焰灼燒滅菌。
（二）無菌操作步驟
準備工作完成后，對來自于自然生長條件下的外植體，按上述培養(yǎng)材料消毒方法滅菌后取出，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中，然后置超凈工作臺酒精燈火焰下方，用滅菌剪刀等器械進行適當分離、切割或其它處理后備用。
在酒精燈火焰處將培養(yǎng)容器的瓶塞（蓋）輕輕打開，瓶口在燈焰處旋轉灼燒，用鑷子將培養(yǎng)材料置入培養(yǎng)液上，將鑷子在酒精瓶中浸蘸酒精，置酒精燈上灼燒后放回支架，然后迅速灼燎瓶塞（蓋）數(shù)秒后塞回瓶口。對繼代培養(yǎng)材料的無菌操作，需在燈焰處打開瓶塞（蓋），繼代材料為液體培養(yǎng)細胞時直接用滅菌吸管吸取培養(yǎng)細胞液放入新培養(yǎng)液中；繼代材料為固體培養(yǎng)細胞時用滅菌鑷子挑取適量材料置新培養(yǎng)液上；繼代材料為其他組織時，用滅菌剪刀或其他器械進行培養(yǎng)材料適當切割后，用滅菌鑷子將其置于新培養(yǎng)液上（中），然后迅速灼燎瓶塞（蓋）數(shù)秒后塞回瓶口。
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