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貂肺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法(四)

貂肺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法(四)
  4)肝細(xì)胞培養(yǎng)
  初代組織塊培養(yǎng):取新鮮肝臟,先剝除被膜和血管等纖維成分,用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊,采用帖壁培養(yǎng)法。
  5)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
  1.取產(chǎn)后的新鮮臍帶。如不立即培養(yǎng)可以保存于4℃中,但不宜超過12小時(shí)。無菌剪取長10~15厘米一段。(貂肺上皮細(xì)胞)其它如胚胎和幼體動(dòng)物的大血管,亦可用于培養(yǎng)。
  2.先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的靜脈中,洗除殘血,注入口處宜用線繩結(jié)扎,以防液體返流。
  3.用血管鉗夾緊臍帶一端,從另端向臍靜脈中徐徐注入*終濃度為0.1%的膠原酶,待末端出現(xiàn)液體后結(jié)扎之,令充滿血管,注入口亦應(yīng)結(jié)扎,以防液體返流,消化3~10分鐘。
  4.吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液,注入離心管中,為獲取更多細(xì)胞,可再注入溫PBS沖洗2~3次徹底清除干凈殘余細(xì)胞,一并注入離心管中離心。
  5.(貂肺上皮細(xì)胞)吸除上清,加1640培養(yǎng)液,制成細(xì)胞懸液,接種入瓶皿中培養(yǎng),順利時(shí)2~3天內(nèi)細(xì)胞即可長成單層。

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